如何**的檢測(cè)ROS對(duì)細(xì)胞的影響？

近年來(lái)，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）廣受人們關(guān)注，因?yàn)镽OS被認(rèn)為是一些公共衛(wèi)生相關(guān)**的原因之一，如**，動(dòng)脈粥樣硬化，糖尿病血管病，骨質(zhì)疏松癥， 一些神經(jīng)退行性**和唐氏綜合癥。市場(chǎng)上許多探針因?yàn)榘邢蚓€粒體并區(qū)分個(gè)體中的ROS技術(shù)不成熟而鎩羽而歸，那么如何**的檢測(cè)ROS對(duì)細(xì)胞的影響？

百螢生物為您推薦AAT Bioquest 研發(fā)的新的線粒體ROS熒光探針家族，它不僅可以特異性地定位在線粒體中，而且可以選擇性地檢測(cè)不同的ROS物種，包括多個(gè)Ex / Em波長(zhǎng)的超氧化物，羥基自由基和過(guò)氧化氫。這些探針是線粒體靶向的ROS探針，可用于通過(guò)熒光成像和流式細(xì)胞儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)活細(xì)胞中ROS水平的外源和內(nèi)源變化。

以下是AAT的ROS熒光探針在經(jīng)典細(xì)胞中的熒光反應(yīng)

圖1. HeLa細(xì)胞中線粒體過(guò)氧化氫（H₂O₂）的熒光圖像（A），Jurkat細(xì)胞的流式細(xì)胞儀分析（B）用OxiVision Blue染色30分鐘，用或不用100μMH₂O₂在37℃下處理90分鐘。 使用DAPI-熒光顯微鏡獲取熒光圖像。 使用Pacific Blue通道中的ACEA NovoCyte流式細(xì)胞儀獲得流式細(xì)胞術(shù)分析。（相關(guān)產(chǎn)品貨號(hào)：21505）

圖2. HeLa細(xì)胞中線粒體羥基自由基（?OH）的熒光圖像。 用或不用芬頓反應(yīng)（10μMCuCl2和100μMH2O2）在37℃下處理用MitoROS OH580染色的細(xì)胞1小時(shí)以誘導(dǎo)外源羥基自由基。 紅色：MitoROS OH580貨號(hào)：16052; 藍(lán)色：Hoechst 33342貨號(hào)：17530。

圖3. RAW 264.7巨噬細(xì)胞中線粒體羥基自由基（?OH）的熒光圖像。用MTOROS OH580染色的細(xì)胞用生長(zhǎng)培養(yǎng)基中0-100 ng / mL的PMA（佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯）處理 在37oC下保持4小時(shí)內(nèi)源性羥基自由基。 紅色：MitoROS OH580貨號(hào)：16052; 綠色：核綠LCS1貨號(hào)：17540。

圖4.用（A）MitoROS 520或（B）MitoROS 580染色的RAW 264.7巨噬細(xì)胞中線粒體超氧化物（O₂? - ）的熒光圖像，使用或不使用50μMAMA（抗霉素A）在37℃下處理30分鐘。 （C）在96孔黑色壁/透明底板中接種過(guò)夜的HeLa細(xì)胞，用MitoROS 580染色，并與50μMPyo（綠膿菌素），50μMAMA或不經(jīng)處理（對(duì)照）在37℃溫育30分鐘。 使用CLARIOstar酶標(biāo)儀（BMG Labtech）在底部讀取模式下在Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)。 （D）用或不用50μMAMA在37℃下處理1小時(shí)的MitoROS 580標(biāo)記的Jurkat細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)分析。 使用流式細(xì)胞儀（BD FACSCalibur）在FL2通道監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)。

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