Amplite 熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒 紅色熒光

        Amplite 熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的谷氨酸檢測的試劑盒，XO（黃嘌呤氧化酶）是一種能催化次黃嘌呤到黃嘌呤或者更進(jìn)一步催化黃嘌呤到尿酸的酶。在嘌呤的分解代謝扮演著重要角色。XO通常能在肝臟或者空腸檢測到。在重度肝損傷，XO釋放到血液中，因此血液中XO檢測試驗可以用來確定肝臟損傷的發(fā)生。黃嘌呤尿是一種少見遺傳病，缺少XO導(dǎo)致血中高濃度黃嘌呤引起腎衰竭等健康**。Amplite XO檢測試劑盒提供了一種快速超敏感的方法，來檢測XO的活性。本試劑盒可以用于96或384微孔板分析，并且無需任何分步驟，就可以輕易地實(shí)現(xiàn)自動化。在實(shí)驗分析種，XO氧化嘌呤堿基，次黃嘌呤、黃嘌呤轉(zhuǎn)變成尿酸或者超氧化物，后者又自發(fā)的降解為雙氧水。該試劑盒使用我們的Amplite Red底物使其成為雙記錄模式。紅色的熒光信號很容易的通過熒光酶標(biāo)儀（540／590nm）檢測到或者被酶標(biāo)儀（576nm）檢測。Amplite黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒在100 ul檢測體積中能檢測到0.15mU／ml的XO。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供*上等的Amplite 熒光法黃嘌呤氧化酶檢測試劑盒。 

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樣品實(shí)驗方案

簡要概述

1.XO標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50μL）
2.添加XO工作溶液（50μL）
3.在室溫下孵育15-30分鐘
4.在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強(qiáng)度（截止570 nm）

溶液制備 

1.儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite 紅色儲備液（250X）：
將40μLDMSO（組分F）加入到Amplite Red底物（組分A）的小瓶中。應(yīng)立即使用原液。注意：在硫醇如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰基乙醇存在下，Amplite Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT或2-巰基乙醇的*終濃度應(yīng)不高于10μM。 Amplite Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，反應(yīng)應(yīng)在pH = 7-8下進(jìn)行。推薦使用所提供的測定緩沖液，pH = 7.4。

2. HRP庫存解決方案（500X）：
將100μL測定緩沖液（組分B）加入到辣根過氧化物酶（組分C）的小瓶中。

3.黃嘌呤氧化酶（XO）標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 U / mL）
將200μL測定緩沖液（組分B）加入黃嘌呤氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（組分E）的小瓶中。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

XO標(biāo)準(zhǔn)
將10μL1U/ mL XO標(biāo)準(zhǔn)溶液加入990μL測定緩沖液（組分B）中以制備10mU / mL XO標(biāo)準(zhǔn)溶液（XO7）。 進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到剩余的連續(xù)稀釋的XO標(biāo)準(zhǔn)品（XO6-XO1）。

3.工作溶液

將20μLDelterite Red儲備溶液（250X），10μLHRP儲備溶液（500X）和50μL黃嘌呤（100X，組分D）加入5mL分析緩沖液（組分B）中，使總體積為 5.08mL黃嘌呤氧化酶（XO）工作溶液,避光。

樣品分析

表1.實(shí)心黑色96孔微孔板中XO標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局

表2.每個孔的試劑組成

1.根據(jù)表1和表2中提供的布局，將XO標(biāo)準(zhǔn)品（XO），空白對照（BL）和測試樣品（TS）制備成固體黑色96孔微孔板。對于384孔板，使用25μL 每孔試劑代替50μL。

2.向XO標(biāo)準(zhǔn)品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50μLXO工作溶液，使總XO測定體積為100μL/孔。 對于384孔板，在每個孔中加入25μLXO工作溶液，總體積為50μL/孔。

3.在室溫下孵育反應(yīng)15至30分鐘，避光。

4.用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570nm，發(fā)射= 590-600nm（*佳Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm監(jiān)測熒光強(qiáng)度。

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